青岛市市政公用基础设施特许经营管理暂行规定
山东省青岛市人民政府
青岛市人民政府令 第184号
《青岛市市政公用基础设施特许经营管理暂行规定》
《青岛市市政公用基础设施特许经营管理暂行规定》已于2005年8月4日经市十三届人民政府第19次常务会议审议通过，现予公布，自2005年10月1日起施行。
市长 夏耕
二○○五年八月十八日
青岛市市政公用基础设施特许经营管理暂行规定
第一条 为推进市政公用基础设施建设运营市场化进程，加强市场监管，保障社会公共利益和公共安全，根据有关法律法规，结合本市实际，制定本规定。
第二条 城市供水、供气、供热、污水处理、垃圾处理等市政公用基础设施，依法实施特许经营的，应当按照有关法律法规关于市场准入行政许可的规定和本规定，通过市场竞争机制选择投资者或经营者，确定其在一定期限和范围内经营，提供市政公用产品和服务。
第三条 市市政公用行政主管部门负责本市市政公用基础设施特许经营管理工作。
其他有关部门应当按照各自职责，共同做好市政公用基础设施特许经营管理工作。
第四条 实施特许经营，应当遵循公开、公平、公正和公共利益优先的原则。
第五条 特许经营可以采取下列方式：
(一)在一定期限内，将市政公用基础设施项目授予特许经营者投资建设及运营，期限届满无偿移交；
(二)在一定期限内，将市政公用基础设施移交特许经营者运营，期限届满无偿移交；
(三)市人民政府确定的其他方式。
第六条 实施特许经营的项目，由市市政公用行政主管部门会同市发展改革、国资、财政、价格、规划、国土、建设、环保等有关部门，根据本市城市建设发展需要和市政公用基础设施规划提出，报市人民政府批准。
特许经营项目确定后，市市政公用行政主管部门应当拟定特许经营实施方案，征求有关部门的意见，报市人民政府批准后组织实施。
第七条 市市政公用行政主管部门应当按照批准的特许经营实施方案，采取招标等方式，依法确定特许经营者，并向社会公示。
特许经营者确定后，市市政公用行政主管部门授予其特许经营权，并与其签订特许经营协议。
第八条 特许经营协议应当包括以下内容：
(一)项目名称；
(二)经营方式、区域、范围、期限；
(三)产品或服务的数量、质量和标准；
(四)投融资期限和方式；
(五)价格和收费的确定方法、标准及调整机制；
(六)设施设备的权属、处置、维护、更新改造和移交；
(七)安全管理；
(八)经营状况的评估期限、方式；
(九)协议的终止和变更；
(十)协议期限届满后设施、资产、档案的移交程序；
(十一)违约责任；
(十二)争议解决方式；
(十三)双方认为应该约定的其他事项。
第九条 特许经营期限应当根据行业特点、规模、经营方式等因素确定，最长不得超过30年。
第十条 市市政公用行政主管部门应当履行下列职责：
(一)协助相关部门核算和监控企业成本及费用，提出价格、收费的确定或调整意见；
(二)对特许经营者经营计划实施情况、产品和服务的质量以及安全生产情况进行监督；
(三)受理并及时处理公众对特许经营者的投诉；
(四)审查特许经营者的年度报告，向市人民政府提交年度特许经营监管报告；
(五)制定临时接管预案，在危及或可能危及公共利益、公共安全等紧急情况下，组织临时接管特许经营项目；
(六)法律、法规、规章规定的其他职责。
第十一条 特许经营者从事特许经营活动，应当公平竞争，诚实守信，向用户提供安全、方便、稳定、价格合理的产品和服务，并履行普遍服务的义务。
第十二条 在特许经营期限内，特许经营者应当遵守有关法律、法规、规章的规定，履行特许经营协议，科学合理地制定年度生产、供应计划，不间断地提供产品和服务。
第十三条 市政公用产品和服务价格按照补偿成本、依法纳税、合理收益的原则，依法定程序予以核定和调整。
特许经营者提供市政公用产品和服务，应当按照规定的价格收取费用。特许经营者提供的产品和服务达不到规定标准或合同约定的，应当依法承担相应的责任。
第十四条 特许经营者在特许经营期限内，应当按照有关标准和规范的要求，对特许经营的设施、设备进行养护、维修、更新改造，确保特许经营项目安全运行。
第十五条 特许经营者应当按照规定的时间向市市政公用行政主管部门报送企业中长期发展规划、年度经营计划、年度报告等相关资料。
特许经营者名称、地址、法定代表人变更的，应当在变更前向市市政公用行政主管部门报告。
第十六条 除法律法规规定可以转让的外，特许经营权不得转让。
第十七条 特许经营者应当允许其他经营者按照规划要求连接其市政公用基础设施，有关费用执行价格主管部门的规定。
第十八条 特许经营者经营的产品或服务项目及其价格应当向社会公示，提供咨询服务，并接受社会监督。
第十九条 特许经营期限内，市市政公用行政主管部门及其他有关部门按照各自职责，可以采取检查等方式，对特许经营者履行法定义务和协议约定义务的情况进行监督检查，依法查处违法行为。
市市政公用行政主管部门及其他有关部门实施监督检查时，不得妨碍特许经营者正常的生产经营活动。
第二十条 市市政公用行政主管部门应当对特许经营者经营情况进行定期评估，并公示评估结果。
评估周期一般不得少于两年，特殊情况下可以实施年度评估。
第二十一条 在特许经营期限内，发生不可抗力或特许经营协议的内容发生变化，确需变更或提前终止协议的，市市政公用行政主管部门应当与特许经营者签订相关的补充协议或提前终止协议。
第二十二条 特许经营者有下列行为之一的，市市政公用行政主管部门应当责令其限期改正，或依法采取有效措施督促其履行义务；逾期不改正的，可依照法律法规的规定或协议约定，终止特许经营协议，取消特许经营权：
(一)未按照法律、法规、规章及有关标准、规范的规定和特许经营协议的约定提供产品或者服务，情节严重的；
(二)不履行设施养护、维修和更新改造义务，危害公共利益和公共安全的；
(三)转让特许经营权或擅自处置、抵押特许经营设施、设备的；
(四)擅自停业、歇业的；
(五)因经营管理不善，发生重大质量、安全生产事故，或亏损严重，无法正常运营的；
(六)不按规划要求投资、建设市政公用设施的；
(七)法律法规禁止的其他行为。
第二十三条 市市政公用行政主管部门应当制定特许经营项目应急预案。特许经营权终止或发生突发事件时，市市政公用行政主管部门应当采取有效措施组织临时接管，保证产品供应和服务的连续稳定。
第二十四条 特许经营权被取消或终止后，特许经营者应当按照特许经营协议约定或者市市政公用行政主管部门规定，办理有关设施、资产及档案等移交手续。
第二十五条 特许经营期限内，确因公共利益需要，特许经营权被取消或市政公用基础设施被依法征用，特许经营者应当给予配合，并有权获得合理补偿。
特许经营者承担政府公益性指令任务造成经济损失的，有权获得合理补偿。
第二十六条 市市政公用行政主管部门或其他有关部门及其工作人员有下列情形之一的，由其上级行政机关或监察机关责令改正，对负主要责任的主管人员和其他直接责任人员依法给予行政处分；构成犯罪的，移交司法机关依法追究刑事责任：
(一)不依法履行监督职责或监督不力，造成严重后果的；
(二)对不符合法定条 件的竞标者授予特许经营权的；
(三)滥用职权、徇私舞弊的。
第二十七条 本规定施行前已经从事市政公用基础设施经营的，经市市政公用行政主管部门依法审查，可以直接授予其特许经营权。
第二十八条 本规定自2005年10月1日起施行。
药品卫生检验方法
卫生部
药品卫生检验方法
卫生部
第一章 药品卫生检验通则
一、供试品取样及注意事项
1．供试品取样应有一定数量，以使检验结果具有代表性。因此，正常的供试品，一般每批应随机抽取两瓶或两盒以上的包装单位。检验时，每次最少应分取两瓶（盒）以上的样品共10克或10毫升，中药蜜丸至少应分取4丸以上共10克；贵重或微量包装的供试品，取样量可酌减
。
2．凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。
肉眼能看出发霉生虫变质、活螨的样品，应判为不合格，无需再作抽样检验。
3．检查活螨的样品抽样量，见活螨的检验法。
4．供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，防止再污染。并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁殖，以免影响检验结果。凡已将原包装启开，则无代表性，应另行取样。
5．供试品在检验过程中，从开封至全部检验操作结束，须防止微生物再污染和扩散。凡直接与样品接触的用具，均应事先灭菌并保持无菌；全部操作须在无菌室内进行，或在相应的条件下，按无菌操作规定进行。
6．供试品稀释后，须在1—2小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死亡。
7．供试品稀释成供试液后，应在均匀状态下取样。凡因抑菌或不溶于水的剂型，其供试品应作特殊处理后进行检验。
8．从供试品检出大肠杆菌或其它致病菌的报告发出起，该菌种保存一个月备查。如有疑问，可送药检部门或上一级药检单位复核。
二、供试品制备
1．凡固体样品，应称取10克，加在100毫升稀释剂（生理盐水或磷酸盐缓冲液）中，经充分研磨或振摇制成供试液。液体样品，则可量取10毫升加在90毫升稀释剂中，混匀后成供试液。
2．凡含有防腐剂或抑菌成份且影响检验的供试品，可经离心沉淀集菌法及其他适宜的方法处理后，检验大肠杆菌和其他致病菌。集菌处理法如下：
取供试液10毫升，以无菌手续放在灭菌的尖底刻度离心管中，经每分钟3500转以上离心沉淀30分钟，用灭菌毛细吸管吸取上清液弃掉，并留下管底的2毫升残余液，将其全部洗净加在培养基中，进行增菌检验。含有不溶性药渣的样品稀释液，可均匀吸取10毫升放在离心管中
，先经每分钟500转左右离心沉淀5分钟，取其上清液放在另一灭菌尖底刻度离心管中，再经每分钟约3500转以上离心沉淀30分钟，轻轻吸取上清液弃掉，取其管底的2毫升残余液全部洗净加在培养基中，增菌检验即得。
3．非水溶性的软膏、乳膏、油膏剂等，可称取样品5克，放在乳钵或烧杯中，加8毫升灭菌的吐温—80充分研磨匀后，加入经140°干热灭菌半小时的西黄蓍胶2．5克研磨匀。再加少量45°的稀释剂充分研磨，使呈均匀乳剂。随后边加入稀释剂边研磨，使成100毫升乳剂
，移至三角瓶中，即为1∶20供试液。
或称取供试品2．5克，分别量取液体石蜡10毫升，吐温—80．10毫升，稀释剂30毫升。先将供试品置乳钵中，边研磨边滴加液体石蜡；然后再边研磨边滴加吐温—80，研磨均匀后；再边加入稀释剂边研磨，开始每次约1毫升，待起团块时，加入稀释剂3毫升，稍停一分钟
，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止，即得1∶20供试液。
4．滤膜法：取规定量的供试品，按1毫升加入灭菌生理盐水50毫升左右，摇匀，用灭菌吸管或注射器注入薄膜过滤器内，减压抽干后，用灭菌生理盐水或其他适宜的溶剂冲洗薄膜3次，每次50毫升。取出薄膜，剪成几条，加至10毫升灭菌稀释剂中，充分摇动，使成供试液。可
供细菌、酵母菌和霉菌计数用。或将剪成几条的上述薄膜加至有关的增菌培养基中培养，可供检查绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌用。
三、阳性菌株对照试验
1．为便于研究观察成药制剂中，某些含有防腐剂和抑菌成份的干扰作用，以及测试常规检验方法和培养基、试剂等的灵敏度时，可将定量的已知阳性对照菌加在供试品稀释液中，按检验供试品的操作方法进行阳性菌的对照试验。阳性对照菌应生长。
2．常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、沙门氏菌50094、绿脓杆菌10104、金黄色葡萄球菌26003和破伤风杆菌64067等。
3．对照试验加入的已知活菌量，每批供试品应控制在50—100个范围之内，需氧菌常用的计数方法，如金黄色葡萄球菌可用37℃培养18—20小时
－6
新鲜肉汤培养物，十倍递增稀释至10 ，取其0．1
－7
毫升按琼脂平板表面涂抹法或取10 稀释液1毫升按浇碟法进行活菌数测定。按每毫升菌液内所含的活菌量，取适量加在供试品里，对照检验即得。破伤风杆菌的阳性对照以作毒力试验为主（具体操作见破伤风杆菌检验项下。）
4．作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染供试品和环境。为此，加入阳性菌的操作可在另外无菌室或其他适宜的地方进行。
第二章 药品卫生检验法
一、细菌总数测定法
细菌总数的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染的活菌数量。测定结果便于判明供试品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的药品原料、工具设备和工艺流程、操作者的卫生状况，是对供试品进行卫生学总评价的综合依据。
1．供试品的测定：
固体供试品，以无菌操作称取若干克，按下列方法之一进行稀释：
（1）将已称取供试品置入灭菌乳钵中加入适量稀释剂，充分研磨，然后移至于灭菌三角瓶中，共加入稀释剂100毫升，使成1∶10均匀供试液。
（2）将已称取的供试品连同100毫升的稀释剂加入灭菌三角瓶或其他相应容器内，进行振荡，使成1∶10的均匀供试液。
液体供试品，可量取10毫升加入90毫升稀释剂，混匀即得。
用1毫升灭菌吸管，吸取1∶10供试液1毫升，沿管壁注入装有9毫升灭菌的稀释剂试管内，混匀即为1∶100稀释液。
另取1毫升灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释。如此每递增稀释一次，应换用1支1
－3
毫升灭菌吸管并充分混匀，稀释至10 或适当倍数备检。
另用1毫升灭菌吸管1支，按高倍稀释至低倍稀释的顺序分别吸取各稀释度的液体1毫升，注入直径9厘米的平皿内，或在作上述10倍递增稀释时，应稀释妥一稀释度，即可取1毫升稀释液注入平皿内。一般可根据对供试品污染情况的估计，从供试液起选择2—3个适宜稀释度进行
测定，每个稀释度各用2—3个平皿。
稀释液注入平皿后，应及时将熔化并冷至45—50℃的肉汤琼脂培养基倾注平皿内，各约15毫升，随即转动平皿使充分混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置37℃培养箱内培养至24小时和48小时，并分别计算平板内生长的的菌落。一般以48小时的菌落数为准。
为减少片状菌落的干扰，也可采用0．001％ＴＴＣ琼脂，在无菌室开盖倒置或换灭菌的干燥陶瓦盖等方法使平板表面干燥后，再进行培养。
2．菌落计数方法：
先用肉眼观察，点数菌落数（霉菌不包括在内），然后持5—10倍放大镜检查有无遗漏。各平板菌落计数后，求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数。如平板中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平板不宜计数。
3、细菌菌数报告：
一般的报告方法是选取同一稀释度平均菌落数在30—300之间的平板，作为菌落总数测定的范围。如每个稀释度使用两个平板，应采用两个平板的菌落平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，或两平板菌落数相差一倍以上，此稀释度不宜采用。如每个稀释度使用三个平板，
应采用三个平板菌落数的平均数，其中有两个平板菌落数较接近，另一个平板相差在一倍以上，或有片状菌落生长时，则应采用前者平均数为该稀释度的菌落数，按下列规则乘其稀释倍数报告之。
稀释度的选择：
（1）若只有一个稀释度，平均菌落数在30—300个之间时，乘以稀释倍数报告之（见表1例1）。
（2）若两个稀释度，其平均菌落数均在30—300个之间，则应求出两者总菌数之比，凡比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的数字。（见表1例2、3）。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均多于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表1例4）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释倍数最低的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表1例5）。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，其中一个稀释度大于300，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1例6）。
（6）若所有稀释度均无菌生长，报告数为＜10个／克或毫升。
菌数的报告，菌数在100以内时，按实有数报告之，大于100时，采用左端前二位数字，在前两位数字之后的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1）。
如供试品经检验，细菌数不合格，需复验时，应重新取样，依法复试两次，细菌数仍有一次不合格时，则该供试品细菌数应判为不合格。
表1 细菌计数结果及报告方法
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＼ 平均菌｜ 供试品稀释倍数 ｜两 数｜ 菌落 ｜
＼ 落数 ｜－－－－－－－－－－－－－－｜稀 ｜ 总数 ｜ 细菌总数报告方式
＼ ｜ －1｜ －2｜ －3｜释 之｜ （个／ ｜ （个／克或毫升）
例 ＼ ｜10 ｜10 ｜10 ｜度 ｜ 克或 ｜
次 ＼｜ ｜ ｜ ｜菌 比｜ 亳升） ｜
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
1 ｜1365｜ 164｜ 20 ｜ — ｜ 16400｜ 16000｜或1．6×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
2 ｜2760｜ 295｜ 46 ｜1．6｜ 37750｜ 38000｜或3．8×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
3 ｜2890｜ 271｜ 60 ｜2．2｜ 27100｜ 27000｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 5
4 ｜不可计 ｜4650｜ 513｜ — ｜513000｜510000｜或5．1×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 2
5 ｜ 27 ｜ 11 ｜ 5 ｜ — ｜ 270 ｜ 270 ｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
6 ｜不可计 ｜ 305｜ 12 ｜ — ｜ 30500｜ 31000｜或3．1×10
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
二、霉菌总数测定法
霉菌总数（包括酵母菌）的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染活的酵母菌、霉菌数量，借以判明供试品的酵母菌、霉菌污染程度及其一般卫生状况。
1．供试品的测定：
供试液与稀释按细菌总数测定项下规定的方法进行。取供试液、1∶100和1∶1000的稀释液各1毫升分别注入平皿内，每个稀释度各用2—3个平皿，加入稀释液后将熔化并冷至45—50°的虎红琼脂培养基约15毫升倾入平皿内，充分摇匀。凝固后，翻转平板置25—2
8°培养72小时，计算平板内生长的霉菌菌落数。若有根霉或毛霉蔓延生长，为避免影响其它霉菌的计数时，应及时将此平板取出计数。
2．酵母菌霉菌菌数报告：
酵母菌、霉菌计数，应选取带有菌丝体的菌落和酵母菌菌落进行点数。先点清每个平板上生长的菌落数，再求出每一稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取平板上菌落数既清楚可数，平均又在5—50个范围以内的菌落数，乘以稀释倍数后，做为供试品的霉菌总数报告之。若有两
个稀释度的菌落数皆在5—50个以内或三个稀释度皆不在此范围之内时，应参照细菌总数测定的规则报告之。
一般眼科制剂的细菌、霉菌总数测定按上述方法进行并报告之。如抗生素或有抑菌作用的制剂，采用适宜的方法处理后，按常规方法进行。
如供试品经检验，霉菌总数不合格，需复检时，应重新取样，依法复试两次。霉菌数仍有一次不合格时，供试品应判为酵母菌、霉菌数不合格。
三、大肠杆菌检验法
大肠杆菌来源于人和温血动物的粪便。凡由供试品中检出大肠杆菌时，表明该药品已被粪便污染，患者服用后，有被粪便中可能存在的其它肠道致病菌和寄生虫卵等病源体感染的危险。因此，大肠杆菌被列为重要的卫生指标菌，是非规定灭菌口服药品的常规必检项目之一。
大肠杆菌检验程序。
表2 肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜爱 ｜ ｜亚 ｜枸 ｜克 ｜ 肠 杆 菌 属 ｜ 沙 雷 氏 菌 属 ｜
菌属 ｜艾 ｜志 ｜德 ｜沙 ｜利 ｜橼 ｜雷 ｜－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－｜
｜希 ｜贺 ｜华 ｜门 ｜桑 ｜酸 ｜伯 ｜ ｜ ｜ 哈夫尼亚 ｜ ｜ ｜ 液化 ｜
－－－－－－｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜那 ｜杆 ｜氏 ｜阴沟｜产气｜－－－－－－｜粘 质｜红色｜－－－－－｜
生化特性 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜
｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜ ｜ ｜ ｜25℃ ｜ ｜ ｜ ｜25℃｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基质 ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基红 ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-/+ ｜-/+ ｜+/- ｜-/+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反应 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+/- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸橼 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜(+) ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
酸盐 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
硫化氢（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
铁） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜-, ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+)w ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氰化钾 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
动力 ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明胶(22℃)｜- ｜- ｜- ｜- ｜(+) ｜- ｜- ｜(+) ｜-/ ｜ ｜- ｜+/ ｜+ ｜ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜(+) ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
赖氨酸脱羧 ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/ ｜+/- ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸双水 ｜d ｜-/ ｜- ｜(+) ｜+/ ｜d ｜- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
解酶 ｜ ｜(+) ｜ ｜/+ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鸟氨酸脱羧 ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脱 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸钠 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜+/- ｜+/- ｜+/- ｜d ｜- ｜+/- ｜- ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖产气 ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+°/- ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜d ｜(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/ ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜(+) ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜-/(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+ ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
卫矛醇 ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜d ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水杨甙 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
侧金盏花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
山梨醇 ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜+ ｜d ｜- ｜+/ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ 果胶杆菌属｜ 形 杆 菌 属 ｜普罗菲登斯菌属
菌属 ｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－
－－－－－－｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
生化特性 ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜25℃ ｜普 通｜奇异｜摩根氏｜雷极氏｜产碱｜司徒氏
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基质 ｜-/+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基红 ｜-/+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反应 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸橼 ｜d ｜+/(+) ｜d ｜+/ ｜- ｜+ ｜+ ｜+
酸盐 ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
硫化氢（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
铁） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜d ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜+ ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氯化钾 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
动力 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明胶(22℃)｜ ｜+/(+) ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
赖氨酸脱羧 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸双水 ｜- ｜-/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
解酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鸟氨酸脱羧 ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脱 ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸钠 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖产气 ｜-/+ ｜d ｜+°/- ｜+ ｜d ｜-/+ ｜d ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜+/- ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜d ｜d ｜(+)
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+/- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜d
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
卫矛醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水杨甙 ｜d ｜+ ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
侧金盏花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
山梨醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜d
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
注：＋90％以上阳性；－90％以上阴性；（＋）迟缓阳性；ｄ有不同生化型；“微弱阳性；＋°微产气；＋／（＋）多数阳性，少
数迟缓阳性；（＋）／＋多数迟缓阳性，少数阳性；＋／－多数阳性，少数阴性；－／＋多数阴性，少数阳性；－／（＋）多数阴
性，少数迟缓阳性；（＋）／－多数迟缓阳性，少数阴性；＋°／－多数阳性微产气，少数阴性。
大肠杆菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓稀释
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－
｜ＭａｃＣ平板或ＥＭＢ｜
－－－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－
｜纯培养｜
－－－－－
37°↓18－24小时
－－－－－－－
｜染色、镜检｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ＩＭＶｉＣ试验｜ ｜乳糖发酵｜
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
（一）增菌培养：
取供试液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖增菌液内。置37°培养18—24小时，进行增菌。
（二）分离培养：
将上述增菌培养物，划线接种于麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）或伊红美兰（ＥＭＢ）琼脂平板上，置37°培养18—24小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色；在伊红美兰平板上的典型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑
湿润，常有金属光泽。由于药物影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。
（三）纯培养：
至少挑选2—3个疑似大肠杆菌菌落，分别接种于肉汤琼脂斜面或三糖（双糖）铁琼脂斜面，置37°培养18—24小时。
（四）染色镜检：
将疑似大肠杆菌的纯培养物涂片、革兰氏染色。经染色镜检证明，为革兰氏阴性短杆菌者，应继续做生化试验。
（五）生化试验：
1．乳糖发酵试验
将上述纯培养物接种于乳糖发酵管，置37°培养24—48小时，凡大肠杆菌，可发酵乳糖产酸产气，或产酸不产气时，加用酸性复红指示剂的应显红色；加ＢＴＢ指示剂时显蓝色。产气者，倒管内有气泡。
2．ＩＭＶｉＣ试验：
①靛基质试验：将纯培养物接种于蛋白胨水，置37°培养24—48小时，沿管壁加柯凡克氏试剂0．3—0．5毫升，轻微摇动，静置片刻，观察液面。阳性反应，液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。
②甲基红试验：将纯培养的菌苔接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基内，置37℃培养24—48小时，加入甲基红试剂数滴，观察结果。阳性反应呈鲜红色或桔红色；阴性反应呈黄色。
③Ｖ—Ｐ试验：将纯培养物接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基内，置37°培养48小时，按培立脱法先加6％ａ－萘酚无水乙醇溶液1毫升，再加40％的氢氧化钾溶液0．4毫升，轻摇后观察结果。阳性反应，加入试剂后，应在15分钟内显红色、深红色。如不明显，可延长至
4小时。
④枸橼酸盐利用试验：将纯培养的菌苔接种于西蒙氏枸橼酸盐琼脂斜面，37°培养24小时，观察结果。阳性反应，斜面有菌苔生长，培养基由绿色变为蓝色。阴性反应斜面无菌苔生长，培养基仍为绿色。当见有微量或痕迹生长的可疑现象时，应将待检菌株分离，纯化后再行试验。
（六）供试品检验报告：
供试品增菌后，在麦康凯或伊红美兰琼脂平板上分离的疑似大肠杆菌，经证实为革兰氏阴性短杆菌，乳糖发酵试验阳性，ＩＭＶｉＣ试验呈＋＋－－或－＋－－反应者，应即报告供试品检出大肠杆菌。〔注〕
大肠杆菌及其他致病菌检查按一次检出结果为准，不再抽样复试。
〔注〕关于大肠杆菌的ＩＭＶｉＣ反应的说明
大肠杆菌ＩＭＶｉＣ试验的模式反应，在一般情况下应为“＋＋－－”或将“－＋－－”也包括在内，共代表了绝大多数大肠杆菌（占99％）的实际反应结果，因而受到了国际上的广泛承认，并将其列为大肠杆菌的常规鉴别ＩＭＶｉＣ反应公式。但个别大肠杆菌的ＩＭＶｉＣ反应，
也可能出现“＋－－－”和“＋＋－＋”等等异常现象。由于这种异常反应出现的频率极少，没有普遍性的代表意义，因而在分类鉴别和统计学上，可以忽略不计。
四、沙门氏菌检验法
沙门氏菌主要寄生在人体、哺乳动物和家禽的肠道内，可随同粪便的排泄污染水源，食品与药品。沙门氏菌的种类繁多，有些对人有致病力，如伤寒沙门菌和副伤寒沙门氏菌；有些对动物有致病力，如鸭沙门氏菌和雏沙门氏菌；尚有一些对人和动物皆有致病力，如肠炎沙门氏菌、鼠伤
寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌等。它们能引起人类伤寒症、急性胃肠炎和败血症等。
带有这些细菌的人与动物常可直接或间接地污染药品的生产环境、工具设备和原料辅料，以及半成品和成品等。特别是用动物脏器制成的药品，污染机率较高，影响患者用药安全，并有可能通过药品的流通而传播。故将沙门氏菌，应列为某些药品的必检项目。
沙门氏菌检验程序。
沙门氏菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓稀释
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌培养｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－
｜ＳＳ与ＥＭＢ平板｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－
｜三糖铁琼脂｜
－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜动｜ ｜镜｜ ｜凝｜ ｜ 一般生化反应 ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜集｜ ｜－－－－－－－－－－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜试｜ ｜葡乳麦甘蔗靛硫尿赖脱氰｜
｜力｜ ｜检｜ ｜验｜ ｜萄 芽露 基化素氨羧化｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜糖糖糖醇糖质氢酶酸酶钾｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
（一）增菌培养：
取1∶10供试品稀释液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖增菌液内。置37°培养18—24小时，进行增菌。
（二）分离培养：
取上述增菌培养物，划线接种于ＳＳ琼脂和ＥＭＢ琼脂平板各一个（划线时，适当增加ＳＳ琼脂平板的涂抹量2—3环，可提高阳检率），置37°培养18—24小时。凡沙门氏菌，在ＳＳ和ＥＭＢ琼脂平板上，菌落一般无色透明或半透明，圆形，周边整齐，表面光滑湿润，在ＳＳ
琼脂平板上中心有时呈黑褐色。如有上述疑似菌落，应选取2—3个分别进行纯培养，按下列方法鉴别。
（三）初步鉴别：
将上述纯培养物分别穿刺并划线接种三糖铁（ＴＳＩ）琼脂，置37°培养18—24小时。凡在ＴＳＩ琼脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈碱性，不变色），下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色（有气泡或无气泡），有动力或无动力，以及产生或不产生黑褐色的硫化氢反应，并经
涂片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，都应继续做生化试验和血清学检查。
（四）生化试验：
取上述疑似菌落的纯培养物、分别接种至葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等发酵管培养基，并接种蛋白胨水和尿素培养基，经37°培养2—5天，观察结果。沙门氏菌一般生化反应和动力检查，绝大数应为、葡萄糖＋，乳糖－，麦芽糖＋，甘露醇＋，蔗糖－，靛基质－，硫化
氢＋，尿素酶－，动力＋。当一般生化试验符合时，应做赖氨酸脱羧酶及氰化钾试验。沙门氏菌赖氨酸脱羧酶试验＋，氰化钾－。系统生化试验，详见表2：肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表。
（五）动力试验：
取上述纯培养物穿刺接种半固体培养基，于37°培养24小时后，观察动力表现。无动力表现的培养物，应在室温（25°左右）保留2—3天后，再观察。
（六）血清学检查：
取上述疑似菌落的ＴＳＩ琼脂培养物少许，与沙门氏菌Ａ—Ｆ多价Ｏ血清作玻片凝集试验，并以生理盐水作对照试验。若凝集试验为阴性反应时，应将菌苔制成浓菌液在100℃水浴中保温30分钟后再进行Ａ—Ｆ多价Ｏ血清凝集试验。将反应结果，结合生化试验，判定之。
（七）供试品检验报告：
凡菌落形态与初步鉴定符合下列情况分别报告如下：
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
血 清 ｜ Ａ—Ｆ多 ｜生理｜ 一般｜
｜ 价Ｏ血清 ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－｜盐水｜ 生化｜ 报告
待 检 菌 ｜ ｜ 100°｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜ 菌苔 ｜ 03′ ｜对照｜ 反应｜
顺 序 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－｜－－－－－｜－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－
1 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜ 符合｜检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
2 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜不符合｜转有关部门进一步检定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
3 ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ 符合｜检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
4 ｜ － ｜ ＋ ｜－ ｜不符合｜转有关部门进一步检定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
5 ｜ － ｜ － ｜－ ｜不符合｜未检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
6 ｜ － ｜ － ｜－ ｜ 符合｜转有关部门进一步检定
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
五、绿脓杆菌检验法
假单胞菌属的绿脓杆菌对人类有致病力，同药品卫生有关。特别在大面积的烧伤、烫伤患者，眼科疾病和其他外伤方面，常因感染绿脓菌后病情加重，造成患者伤处化脓，并可引起菌血症等，眼角膜溃疡甚至失明，损害病人健康。因此一般眼科制剂和外伤用药，规定不得检出绿脓杆菌
。
绿脓杆菌检验程序（见次页）。
绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌的主要特性鉴别见表3。
（一）增菌培养：
取供试液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖培养液内，置37°培养18—24小时。
增菌后，如有绿脓杆菌生长，液体表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
一般滴眼剂如为抗生素或有抑菌作用的供试品，取样4毫升，用滤膜法处理后，将薄膜分成4片，分别接入100毫升的胆盐乳糖增菌液两瓶中，其中一瓶接阳性菌作对照。置37°培养18—24小时。
（二）分离培养：
取上述增菌培养物（应尽量从培养液的薄菌膜部位挑取），划线在十六烷三甲基溴化铵或明胶十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37°培养18—24小时。
凡绿脓杆菌在十六烷三甲基溴化铵平板上或在明胶十六烷三甲基溴化铵平板上其菌落扁平无定形周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性蓝绿色色素，在含有明胶平板上除上述形态外，菌落周围呈现明胶液化环。
挑取疑似绿脓杆菌菌落2—3个进行纯培养。
（三）染色镜检：
挑取疑似菌落纯培养物、涂片、革兰氏染色，经镜检为阴性杆菌者，应进行氧化酶试验。
（四）生化试验
1．氧化酶试验
取一小块白色洁净的滤纸片放在平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌疑似菌落的纯培养物，涂在滤纸片上，然后滴加一滴新鲜配制的1％二甲基对苯二胺盐酸盐试液于培养物上，在30秒钟之内，纸片上的待检培养物出现粉红色，并逐渐变为紫红色时，即为氧化酶试验阳性。若培养物
不变色，氧化酶试验阴性，供试品可按未检出绿脓杆菌报告。
2．绿脓菌素试验：
挑取纯培养物分别接种在专供测定绿脓菌素用的ＰＤＰ琼脂斜面培养基上，置37°培养24小时后，在试管内加氯仿3—5毫升，充分振摇，将琼脂斜面培养物中的待检色素提取在氯仿液里。待氯仿提取液呈蓝绿色时，用吸管将其移到另一试管中，并在该液中加1Ｎ的盐酸1毫升左
右，振摇后，静置片刻，如果在上层的盐酸液内出现粉红色时，即为阳性，表明被检菌的培养物中有绿脓菌素存在。如阴性，应继续将纯培养物接种在ＰＤＰ琼脂斜面上，37°培养2—3天后，检查有无绿脓杆菌素产生。
3．硝酸盐还原产气试验：
绿脓杆菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37° ↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－－－－
｜十六烷三甲基溴化铵平板或明｜
｜胶十六烷三甲基溴化铵平板 ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
37° ↓18—24小时
－－－－－
｜纯培养｜
－－－－－
↓
－－－－－－－
｜染色、镜检｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－
｜氧化酶试验｜
－－－－－－－
｜
（－） －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ （＋）
↓ ↓
阴 性 －－－－－－－－
↓ ｜绿脓菌素试验｜
－－－－－ －－－－－－－－
｜报 告｜ （一） ↓ （＋）
－－－－－ －－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－ －－－－－
↓ ↓ ↓ ｜报 告｜
－－－－－
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜明胶液化｜ ｜硝酸盐还原｜ ｜42°生长试验｜
｜ 试验 ｜ ｜产气试验 ｜ ｜ ｜
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
表3 绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌的主要特性鉴别表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜分离 ｜ 色素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鉴 别 培 养 ｜－－－｜－－－－－－－－－－－｜ ｜氧｜氧｜ ｜精解｜硝 产｜ ｜42
｜ ｜ ｜ ｜ ｜鞭 ｜化｜ ｜ 乙 ｜氨 ｜酸 ｜液｜生
－－－－－－－－－－－｜十六烷｜ 绿 ｜ 萤 ｜ 其 ｜毛 ｜葡｜化｜ 酰 ｜酸 ｜盐 ｜化｜长
｜三甲基｜ 脓 ｜ 光 ｜ 他 ｜染 ｜萄｜ ｜ 氨 ｜双 ｜还 ｜明｜试
菌 种 ｜溴化铵｜ 菌 ｜ 色 ｜ 色 ｜色 ｜糖｜酶｜ 酶 ｜水酶｜原 气｜胶｜验
｜琼脂 ｜ 素 ｜ 素 ｜ 素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
绿脓杆菌 ｜ ＋ ｜＋／－｜＋／ ｜＋／－｜端极｜＋｜＋｜ ＋ ｜＋ ｜ ＋ ｜＋｜＋
(P. aeruginosa) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜单毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
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萤光假单胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜端极｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜－／＋｜＋｜－
(P. fluorescens) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜多毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
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恶臭假单胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜” ｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜ － ｜－｜－
(P. putida) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
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洋葱假单胞菌 ｜＋／－｜ － ｜ － ｜－／＋｜” ｜＋｜＋｜ ＋ ｜－ ｜ － ｜＋｜＋／－
(P. cepacia) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
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